作者
李小霞1,2，桂小薇1，肖仲久1,2
单位：1.遵义师范学院生物与农业科技学院；2.贵州省赤水河流域植物资源保护与应用研究特色重点实验室
简介：李小霞，副教授，硕士，从事微生物学研究。
基金项目国家自然科学基金项目();贵州省科技厅自然科学基金项目(黔科合J字LKZS〔〕18号);贵州省科技创新人才团队建设项目(黔科合人才团队〔〕号)。
放线菌是一类重要的可再生资源，因为能产生许多种抗生素而受到重视，是一种重要的资源微生物。目前临床上使用的抗生素，有60%以上由放线菌发酵生产，放线菌还能够产生酶抑制剂、免疫抑制剂及其他生理活性物质，在生产微生物农药、农用抗生素、植物生长调节剂以及石油脱蜡、污水净化等方面也有广泛应用。土壤是放线菌生活的最主要场所。
目的赤水河是我国长江上游支流，该流域属于暖温带高原气候，是我国茅台酒以及董酒、习酒、郎酒等数十种闻名中外美酒的发源地，因其独特的地理环境，蕴藏着丰富的微生物资源。因此，笔者对贵州省赤水河流域茅台段土壤放线菌进行了分离、培养与DNA提取，旨在为放线菌的进一步开发与利用提供试验材料和理论依据。
方法从赤水河流域采集土壤样本进行预处理，采用土壤稀释分离法分离土壤中的放线菌，土壤悬液浓度依次为0.01、0.、0.0、0.00克/毫升；在高氏1号合成琼脂培养基上采用分区划线的方法进行放线菌的培养纯化，并运用插片法对其进行形态学观察。利用CTAB法提取放线菌基因组DNA。
结果试验分离得到6株放线菌。放线菌的菌落形态多干燥致密，不透明，呈粉末状，由于孢子、气生菌丝和营养菌丝颜色不同，常使菌落正反面呈不同颜色，有橙黄色、灰色、白色、浅棕色、黑色等，有些表面覆盖1层粉沫状的孢子(图1Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ)，有些菌落可以产生水溶性色素(图1Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ)。
图1放线菌的培养
由图2可知，基内菌丝无分隔，长度不定。气生菌丝发达，直生或分支丝状，成熟后生成孢子丝，孢子丝排列方式随菌种而不同，有的呈螺旋状，有的呈波浪弯曲形。可见，纯化的菌株为放线菌，不是霉菌等非目的菌株。
图2放线菌菌丝的形态特征观察
由图3可知，6号放线菌总DNA约为23.13kb，DNA条带清晰明亮，得率较高，说明DNA提取效果较好，因此提取DNA可作为后续PCR扩增的材料。
图3放线菌总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果
结论0.克/毫升土壤悬液最适宜分离放线菌。提取的放线菌DNA条带完整，大小约为23.13kb。
该研究采用液氮快速研磨法，并且在提取的过程中加入溶菌酶，加速了放线菌细胞壁的破碎，DNA释放完全，提取效果非常好。此外，研钵要预冷，研磨时间最好控制在2分钟以内。
选自《安徽农业科学》年08期
原题：赤水河流域茅台段土壤放线菌的分离·培养·DNA提取
安徽农业科学
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