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质控菌株的保藏5种普通菌种保藏方法介绍

菌种保藏原则

用低温、干燥和隔绝空气等方法可以使微生物代谢能力降低。因此,采用适宜的方法对菌种进行保藏,可以确保菌种在一定时间内存活并且不被污染、不产生变异,使菌种保持原有的活性以及生理生化等遗传特性。

普通菌种保藏方法

①传代培养保藏法

将菌种接种到适宜的培养基上,培养后,放置于4deg;C冰箱中保存,并每隔一定时间进行传代。根据菌种生长的不同要求,可分为斜面培养、穿刺培养和液体培养。

此方法是多数实验室常用的菌种保藏方法,具有操作简单、使用方便的优点。但多次传代会使微生物发生变异,而且污染杂菌的机会也相对较多。

②液体石蜡保藏法

此方法是传代培养的变相方法。在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可以防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可以阻止氧气进入,从而适当延长保藏时间。但此方法对于某些可以同化烃类的微生物则不宜使用。

此方法实用而且效果好。而且制作简单,不需要特殊设备,不需要经常传代。但保存时必须直立放置,所占位置较大,不便于携带。

③真空冷冻干燥法

将菌种在极低温度(-70deg;C左右)下快速冷冻,然后利用减压使其中的水分升华,达到干燥的目的。微生物培养物经过该方法处理后处于一种低温、干燥、缺氧的条件下,因而他们代谢是相对静止的,可以保存较长时间。除不产孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用该方法外,其他如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等都可以采用该方法,且效果较好。一般真空冷冻干燥需加入保护剂,如牛乳、血清、糖类(葡萄糖、半乳糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、蜜二糖、棉籽糖、糊精等)、甘油、山梨醇、氨基酸类(谷氨酸、精氨酸、苹果酸)、维生素C(抗坏血酸)、明胶、蛋白胨等一种或多种物质。

此方法是菌种保藏方法中最有效的方法之一,适用于菌种长期保存,一般可保存几年至十几年,但设备和操作要求都比较复杂。

④砂土管保藏法

将斜面上的新鲜培养物制成菌悬液或孢子悬液,然后将悬液无菌注人已灭菌好的砂土管中,使细胞或孢子吸附在砂子载体上。置于干燥器中干燥后加以保存。

此方法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌的保存,可保存2年左右。

⑤液氮保存

将保存的菌种用保护剂制成菌悬液密封于安瓿瓶内,迅速冷冻后,贮藏于-deg;C~-deg;C的液氮超低温冰箱中。该方法优点是保藏时间长,有些菌种保存期达9年以上。

此方法除适宜于一般微生物的保藏外,对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏,而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。




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