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MHC
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深医四班
微生物
真菌学总论
掌握：
1.真菌的形态与结构；
2.真菌的致病性。
熟悉：真菌的微生物学检查法。
了解：
1.真菌的分类；
2.真菌感染的防治原则。
（1）真菌的致病类型。
（2）单细胞真菌与多细胞真菌的特点。
名词解释
真菌：是一大类真核细胞型微生物。细胞微生物。细胞核高度分化，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器。细胞壁由几丁质或纤维素，不含绿叶素，不分化根、茎、叶。少数为单细胞、多数为多细胞结构。
菌丝：孢子生出嫩芽，称为芽管，芽管逐渐延长呈丝状，称为菌丝。
孢子：是由生殖菌丝产生的圆形或者卵圆形结构，是真菌的生殖结构。孢子也是真菌的鉴定和分类的主要依据。
假菌丝：类酵母型真菌的母细胞以芽生方式繁殖，出芽产生的芽生孢子持续延长，但不断裂、不与母细胞脱离，产生相互连接成藕节状较长的细胞链，可伸入培养基内。
酵母型菌落：是单细胞真菌的菌落形式。菌落柔软、致密、光滑、湿润。显微镜下观察可见芽生孢子，无菌丝。新生隐球菌的菌落属于此型。
类酵母型菌落：亦称酵母样菌落，是单细胞真菌的菌落形式。外观上与酵母型菌落相似，但显微镜下可呈藕节状细胞链的假菌丝，由菌落向下生长，伸入培养基中。白假丝酵母的菌落属此型。
丝状型菌落：是多细胞真菌的菌落形式。由菌丝体和孢子所组成。菌落呈絮状、绒毛状或粉末状，菌落正面、背面可呈不同的颜色，其菌落的形态和颜色常作为真菌鉴定、分类的参考。大多数丝状真菌菌落属于此型。
双相型菌落：有些真菌可因环境条件（不同成分的培养基与温度）的改变，而发生两种形态的互变，称为双相型真菌，即在宿主体内或37°C培养时呈酵母型，而在25°C培养时则呈菌丝型，如球孢子菌、组织胞浆菌、孢子丝菌等。
真菌病：由致病性真菌和机会致病性真菌引起感染，并表现为临床症状者称为真菌病。
一、形态与结构
（一）单细胞真菌
1.酵母型真菌
无菌丝，母细胞以芽生方式繁殖，菌落与细菌的菌落相似。
2.类酵母型真菌
母细胞以芽生方式繁殖，出芽产生的芽生孢子持续延长，连接成藕节状较长的细胞链，即假菌丝（pseudohypha）。其菌落与酵母型真菌相似，培养基内可见假菌丝。
（二）多细胞真菌
1.菌丝
（1）根据隔膜的消长分为：有隔菌丝，无隔菌丝。
（2）根据功能不同分为：营养菌丝，气生菌丝，生殖菌丝。
（3）根据形态不同分为：单纯菌丝，球拍状菌丝，破梳状菌丝，
螺旋状菌丝，结节状菌丝，鹿角状菌丝，等。
2.孢子（spore）
真菌的生殖结构，由生殖菌丝产生，是鉴定和分类的主要依据。
（1）无性孢子
不经两性细胞配合而产生的孢子。病原性真菌大多数产生无性孢子。
分为叶状孢子：芽生孢子、关节孢子、厚膜孢子，分生孢子：大分生孢子、小分生孢子，孢子囊孢子。
（2）有性孢子
细胞间配合（质配和核配）后产生，绝大多数为非致病性真菌所具有。
分为接合孢子，子囊孢子，担（子）孢子。
二、致病性
（一）真菌感染
1.真菌病（mycoses）
由致病性真菌和机会致病性真菌引起感染，并表现临床症状者称为真菌病。同一种疾病可以由不同种真菌引起；一种真菌也可以引起不同类型的疾病。
2.感染类型
可分为原发性感染：由致病性真菌包括球孢子菌、芽生菌、组织胞浆菌及马尔尼菲青霉引起；继发性感染：较多见，由机会致病性真菌引起。
（二）真菌性超敏反应
1.按性质分类
感染性超敏反应：感染，Ⅳ型；
接触性超敏反应：吸入或食入，Ⅰ～Ⅳ型。
2.按部位分类
皮肤超敏反应
呼吸道超敏反应：农民肺（farmer’slung）
消化道超敏反应
（三）真菌毒素中毒
1.来源:真菌代谢产生毒素，存在于农作物、食物或饲料中
2.表现:肝、肾、神经、造血系统等损伤
致癌（黄曲霉毒素等）
（四）免疫性
真菌感染（特别是深部真菌感染），人体对入侵真菌有一定天然免疫力，包括皮肤黏膜屏障作用和正常菌群拮抗作用，吞噬细胞吞噬作用。适应性免疫中，细胞免疫是关键，体液免疫可能有部分作用。总体来说，免疫力不强。
真菌的微生物学检查法
（一）标本的采集
1.浅部：鳞屑、病发或甲屑
2.深部：痰、脓、血、尿、便、脑脊液、胸水及分泌物等
3.注意：标本应足量、新鲜，严格无菌操作，资料应齐全
（二）形态学检查
1.直接镜检：标本处理（10%KOH），涂片染色（稀薄标本需离心，革兰染色、墨汁染色）
2.分离培养：含抗生素和放线菌酮的SDA、PDA
酵母型和类酵母型真菌：37℃，革兰染色
丝状真菌：25℃，乳酸酚棉蓝染色
（三）血清学检查
检测真菌抗原、代谢产物及机体产生的抗体
1.抗原：1,3-β-D-葡聚糖（G试验）
甘露聚糖（EIA法或免疫荧光碳氢化合物电泳）
半乳甘露聚糖（GM试验）
隐球菌荚膜多糖（乳胶凝聚试验）
2.抗体：甘露聚糖抗体（凝胶对流电泳）
烯醇化酶抗体（凝集试验）
马尔尼菲青霉抗体（ELISA法）
3.代谢产物：D-阿拉伯糖醇（酶荧光法）
烯醇化酶（斑点印迹法或荧光抗体染色）
四、核酸测序
1.核酸G+Cmol%测定
2.PCR相关技术：巢氏PCR、复合PCR、荧光PCR等
3.DNA指纹技术：RFLP、DGGE、SSCP等
4.核酸杂交：原位杂交、RDB、基因芯片技术等
5.DNA特殊序列分析：ITS、LSU、TEF、线粒体cytb、COⅠ和COⅡ、β-微管蛋白等基因
病原性真菌
掌握：机会致病性真菌的生物学性状、致病性及微生物学检查。
熟悉：皮肤癣菌的常见种类及致病性。
了解：皮下组织感染真菌和地方性流行真菌的常见种类及致病性。
（1）白假丝酵母的生物学特性、致病性和微生物学检查。
（2）新生隐球菌的生物学特性、致病性和微生物学检查。
名词解释
浅部感染真菌：是指寄生或腐生与角蛋白组织（表皮角质层、毛发、夹板）的真菌。可分为皮肤癣菌和角质层癣菌两类。
皮下组织感染真菌：主要包括孢子丝菌和着丝真菌，经外伤侵入皮下，一般感染只局限于局部，但也可扩散至周围组织。
孢子丝菌病：人类可通过有创伤的皮肤接触感染有孢子丝菌的土壤、植物、或污染物，引起皮肤、皮下组织及相邻淋巴系统的慢性感染。
着色真菌病：着色真菌可由外伤侵入人体，引起颜面、下肢及臀部等暴露部位感染，病损皮肤呈境界鲜明的暗红色或黑色区，故称着色真菌病。
深部感染真菌：侵犯表皮及其附属器以外的组织和器官的病原性真菌或机会致病性真菌。
假丝酵母病：假丝酵母引起的皮肤、粘膜和内脏的急、慢性感染。
厚膜孢子：白假丝酵母培养后在菌丝顶端、侧缘或中间可见较大、厚壁的圆形或梨形细胞。
隐球菌病：可侵犯人和动物引起机会致病性感染。最易侵犯的是中枢神经系统，引起慢性脑膜炎。
曲霉分生孢子头：曲霉的分生孢子梗顶端膨大形成半球形或椭圆形的顶囊，在顶囊上以辐射的方式长出一、二层杆状小梗；小梗顶端生长呈链状排列在分生孢子，形成一个菊花样的头状结构。
曲霉病：曲霉能侵犯机体许多组织器官，引起肺曲霉、全身性曲霉病、中毒及肿瘤。
双相型真菌：对环境温度敏感可发生形态转换的一类真菌，在宿主体内或37°C培养时呈酵母型，而在25°C培养时变为菌丝型。
肺孢子菌肺炎：肺孢子菌经呼吸道吸入肺内，可引起免疫缺陷或免疫功能低下者的机会性感染。
一、机会致病性真菌
（一）假丝酵母（Candida）
1.致病菌种：10个种具有致病性，最常见的是白假丝酵母
2.生物学特征：菌体圆形或卵圆形，以芽生方式繁殖
形成类酵母型菌落
在组织内可形成芽生孢子及假菌丝
培养时形成厚膜孢子可作为鉴别依据
3.致病性：机会致病菌，正常存在于口腔、上呼吸道、肠道与阴道黏膜，菌群失调或抵抗力降低时可引起假丝酵母病（candidiasis)。
所致疾病：（1）皮肤、黏膜感染（2）内脏感染（3）中枢神经系统感染
4.微生物学检查法
（1）直接镜检
圆形或卵形芽生孢子、假菌丝
（2）分离培养
SDA培养基：乳白色酵母样型菌落
镜下：假菌丝、成群的卵圆芽生孢子
（3）鉴别和鉴定
芽管形成试验
厚膜孢子形成试验
动物试验
（二）隐球菌（Cryptococcus）
1.代表菌种：新生隐球菌
2.生物学性状：
圆形的酵母样细胞，以芽生方式繁殖，无假菌丝，形成酵母型菌落
外周有一层肥厚的胶质样荚膜根据荚膜多糖分为A、B、C、D四个血清型，临床分离株为A、D型
3.致病性
分布于鸽粪，人类体表、口腔、粪便。为机会致病菌，可引起隐球菌病（cryptococcosis）。
（1）感染：外源性（多数）
内源性（少数）
（2）致病物质：荚膜多糖
（3）感染途径：呼吸道
（4）所致疾病：肺部感染
（5）播散感染：最易侵犯CNS，预后不良
4.微生物学检查法
（1）直接镜检
墨汁涂片见圆形有折光性的菌体
外周有透明的肥厚荚膜
（2）分离培养
培养：SDA培养基
菌落：酵母型菌落，细小菌落（乳白色→桔黄色）
镜检：圆形或卵圆形菌体，无假菌丝
（3）其他检查法
尿素酶试验、胶乳凝集试验、荧光抗体
（三）曲霉（Aspergillus）
1.分布广泛，种类繁多，属于机会致病菌
主要机会致病菌：烟曲霉（A.fumigatus）：最常见、黄曲霉（A.flavus）、黑曲霉（A.niger）、土曲霉（A.terreus）、构巢曲霉（A.nidulans）
2.生物学特征
（1）菌丝：有隔，多细胞性，有分枝；足细胞
（接触培养基的部分，厚壁而膨大）
（2）分生孢子梗：从足细胞直立生长
（3）顶囊：孢子梗顶端膨大，半球形或椭圆形
（4）小梗：顶囊上，辐射状，一层或二层杆状
（5）分生孢子：小梗顶端，成串，球形，不同颜色
（6）分生孢子头：菊花样的头状结构
（7）菌落：绒毛状或絮状，菌种不同，颜色不同
3.致病性
侵犯机体许多部位，统称为曲霉病（aspergillosis）
（1）感染类型：直接感染超敏反应毒素中毒
（2）所致疾病：肺曲霉病全身性曲霉病中毒与致癌
（四）镰刀菌（Fusarium）
1.主要致病菌：
茄病镰刀菌（F.solani）
尖孢镰刀菌（F.oxysporum）
串珠镰刀菌（F.moniliforme）
2.所致疾病：
引起的感染统称为镰刀菌病（fusaridiosis）
浅部：真菌性角膜炎，爪真菌病
深部：从鼻窦、呼吸道及皮肤入侵，感染肺、肝、脾、肾等其他器官
生长速度：迅速
菌落：菌落呈棉絮状，可产生浅黄、紫色、玫瑰红色等色素
大分生孢子：两头尖，中央弯曲，呈镰刀形，有分隔，呈多细胞性
小分生孢子：卵圆形或棒状，散在或假头状着生，多为单细胞性
（五）毛霉
接合菌门广泛存在
机会致病菌，引起毛霉病（mucormycosis）
常见菌种：总状毛霉（M.racemosus）高大毛霉（M.mucedo）
丝生毛霉（M.corymbifer）
培养特征：生长迅速
镜下特征：菌丝：无隔，粗大，直角分枝
孢子囊：球形，孢子囊梗顶生，内有大量孢子囊孢子
致病性：引起脑膜炎，发病急，进展快，诊断困难
微生物学检查：镜检：宽大、不规则、分枝状的无隔菌丝
组织HE染色：菌丝呈明显嗜苏木精染色
培养后镜检：无隔菌丝、孢子囊及孢子囊孢子
（六）肺孢子菌
1.分布：自然界、人和多种哺乳动物肺内
2.常见菌：卡氏肺孢子菌（P.carinii）
伊氏肺孢子菌（P.jiroveci）
3.特点：单细胞型，兼具原虫及酵母菌特点
4.发育：滋养体（小滋养体，大滋养体）、囊前期、孢子囊
致病性：机体免疫力下降时可引起肺孢子菌肺炎（pneumocystispneumonia,PCP）、中耳炎、肝炎、结肠炎等
微生物学检查：镜检：革兰或美蓝染色，若发现滋养体或孢子囊可确诊
血清学诊断：ELISA、IF、补体结合试验
分子生物学诊断：PCR及DNA探针技术
二、皮肤癣菌
疾病：皮肤癣（tinea），手足癣最多见
三个属：表皮癣菌属（Epidermophytonspp.）
毛癣菌属（Trichophytonspp.）
小孢子癣菌属（Microsporumspp.）
（一）表皮癣菌属
1.致病菌种：絮状表皮癣菌（E.floccosum）
2.侵犯部位：侵犯表皮、甲板，不侵犯毛发
3.疾病：体癣、足癣、手癣、股癣和甲癣
4.形态学特征：
（1）大分生孢子：侧生或顶生，棍棒状，壁薄
（2）小分生孢子：无
（二）毛癣菌属
1.致病菌种：红色毛癣菌（T.rubrum）石膏样毛癣菌（T.gypseum）[异名：须毛癣菌（T.mentagrophytes）]断发毛癣菌（T.tonsurans）
2.侵犯部位：侵犯表皮、甲板，毛发
3.疾病：体癣、足癣、手癣、股癣、甲癣、发癣
4.形态学特征：（1）大分生孢子：细长、薄壁、棒状、两端钝圆
（2）小分生孢子：侧生、散在，呈葡萄状
（三）小孢子菌
1.致病菌种：铁锈色小孢子菌（M.ferrugineum）犬小孢子菌（M.canis）
石膏样小孢子菌（M.gypseum）
2.侵犯部位：毛发，皮肤
3.疾病：头癣、体癣
4.形态学特征：（1）大分生孢子：厚壁，梭形（2）小分生孢子：卵圆形，侧枝末端
诊断学
额外心音
杂音
杂音瓣膜区分布
心包摩擦音
脏层与壁层心包由于生物性或理化因素致纤维蛋白沉积而粗糙，以致在心脏搏动时产生摩擦而出现的声音。音质粗糙、高音调、搔抓样、比较表浅，类似纸张摩擦的声音。在心前区或胸骨左缘第3、4肋间最响亮，坐位前倾及呼气末更明显。典型者摩擦音的声音呈三相：心房收缩－心室收缩－心室舒张期，但多为心室收缩－心室舒张的双期摩擦音，有时也可仅出现在收缩期。心包摩擦音与心搏一致，屏气时摩擦音仍存在。见于各种感染性心包炎，也可见于急性心肌梗死、尿毒症、心脏损伤后综合征和系统性红斑狼疮等非感染性情况导致的心包炎。当心包腔有一定积液量后，摩擦音可消失。
参考文献
1.李凡，《医学微生物学》，人民卫生出版社第九版，-
2.万学红，《诊断学》，人民卫生出版社第九版，-
文案：17级4班
排版：郭瑞祥
初审：陈秋敏
审核：李世阳
审核发布：丁小球
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