自然界的微生物由于种类不同,它们对营养的需求也有差别,因此在菌种分离、保藏以及工业发酵中,都要根据该菌株对营养需求的特点来配制相应的培养基。
在科研生产上按所用原料不同,又可分两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。含化学试剂的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不适合长期保留,现已有公司改制成粉末。培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此保管时必须防潮、避光,置低温处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的储存必须放在2~6℃的冰箱内。常见培养基有以下一些。
一细菌培养基配方一:牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.0g,蛋白胨1.0g,氯化钠0.05g,琼脂1.5g,水ml。在烧杯内加水ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,置火上加热,待各组分溶解后,加人琼脂,不断搅拌以免粘底。待琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH为7.2~7.6,分装各试管,加塞,用高压蒸汽灭菌0min备用。
配方二:肉汤培养基
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)g,用刀剁成肉末,加人ml蒸馏水和5g蛋白胨。煮沸,转文火炖2h,过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液调pH为7.5左右。每支试管内加人10ml。肉汤和少量碎肉末,灭菌,备用。
配方三:根瘤菌培养基
葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.05g,碳酸钙g,硫酸镁0.02g酵母粉0.04g,琼脂20g,水0ml,1%结晶紫溶液1mL。先把琼脂加水煮沸溶解,再分别加入其他组分,搅拌溶解后,分装,灭菌,备用。
配方四:LB培养基
LB培养基的配方如下:胰蛋白胨(Tryptone)10g/L,酵母提取物(Yeastextract)5g/L,氯化钠(NaCl)10g/L,
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)。
二放线菌培养基配方一:淀粉琼脂培养基(高氏培养基)
可溶性淀粉2g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0.05g,硫酸镁0.05g,硫酸亚铁0.g,琼脂2g,水mL。先把淀粉用5ml水调成糊状后,倒入95mL水,搅匀后加入其他药品,使其溶解。煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH为7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
配方二:面粉琼脂培养基
面粉60g,琼脂20g,水0mL。用水将面粉调成糊状,加水到mL,文火煮0min。另取mL水,放入琼脂,加热煮沸到溶解,把两液调匀,补充水分,调整pH到7.4,分装,灭菌,备用。
三真菌培养基配方一:萨氏(Sabourauds)培养基
蛋白胨10g,琼脂20g,麦芽糖40g,水0mL。先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40g麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,溶解后分装,灭菌,备用。本培养基可培养许多种类真菌。
配方二:马铃薯糖琼脂培养基
取g切成小块,加水0ml,煮沸0min后,补足水分。在滤液中加入10g琼脂,煮沸溶解后加糖20g(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三:豆芽汁培养基
黄豆芽g,琼脂15g,葡萄糖20g,水0mL。洗净黄豆芽,加水煮沸0min,用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌溶解,补足水分到0mL,分装,灭菌,备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。配方四:豌豆琼脂培养基豌豆80粒,琼脂5g,水mL。取80粒干豌豆加水适量,煮沸1h,纱布过滤,在滤液中加入琼脂,煮沸溶解,分装,灭菌,备用。
四酵母培养基1基础培养基YPD或YEPD:YeastExtractPeptoneDextroseMedium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基
配方:1%YeastExtract(酵母膏),2%Peptone(蛋白胨),2%Dextrose(glucose)葡萄糖,(若制固体培养基,加入2%琼脂粉)
配制方法:1,溶解10gYeastExtract(酵母膏),20gPeptone(蛋白胨)于ml水中,如制平板加入20g琼脂粉2,加入20gDextrose(glucose)(葡萄糖),高压度15min注:葡萄糖,yeastextract,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以℃15min灭菌,(葡萄糖溶液灭菌后加入)。
2基本培养基配方一:NaAc10g,(NH)2SO45g,NaHPO40.05g,MgSO4-7H2O1g,维生素Bug,蒸馏水mL,处理琼脂2g,pH自然,℃灭菌15min;
配方二:葡萄糖2%,KHPO40.01%,MgSO4·7H2O0.05%,(NH)2S04,0.05%,处理琼脂2%。蒸馏水配制,pH6.0,℃灭菌15min;
配方三:葡萄糖10g,NaCl0.01g,(NH)2SO41g,微量元素母液1mL,K2HPO40.g,维生素母液1mL,KI0.0g,MgSO4·7H2O0.05g,CaCl·2H2O0.01g,蒸馏水0mL。pH5.5~6.0,℃灭菌25min;
微量元素母液:HPO41mL,ZnSO4·7H2O7mg,CuSO4-5H2O1mg,CaCl2-6H2O5mg,蒸馏水mL。
维生素母液:烟碱酸40mg,肌醇mg,泛酸20mg,对氨基苯甲酸20mg,核黄素20mg,维生素B40mg,生物素0.02mg,吡哆醇40mg,蒸馏水mL。
YNB培养基YNB培养基由以下A、B、C三种溶液组成:
A液,维生素混合液:维生素B0mg,烟酸mg,吡哆醇mg,生物素20mg,泛酸钙0mg,核黄素mg,肌醇00mg,对氨基苯甲酸mg,无离子水0mL;
B液,微量元素液:HBO4mL,MnSO4·7H2Omg,ZnSO4-7H2Omg,CuSO4-7H2O40mg,FeCls?6H2Omg,Na2MnOmg,无离子水0mL。
C液,其它无机盐液:KI0.01mg,CaCl2-2H2O0.01g,K2HPO40.g,KH2PO40.g,MgSO4·7H2O0.05g,NaCl0.01g,无离子水0ml。
配制方法:取A液1mL、B液1mL、C液10mL、无离子水0mL,混合,调pH为6.5,即成。说明:①配制YNB时,先分别将已灭菌分装的A、B液各1mL与C液10mL,在无菌条件下混合,再将已灭菌的(NH4)2SO4按0.05%的量加人到无离子水中,混匀即可。
注:配制糖发酵培养基时,方法同上,只是按2%浓度加入不同的糖液。
五食用菌菌种培养基配方一:马铃薯-蔗糖-琼脂培养基
20%马铃薯煮汁0mL,蔗糖20g,琼脂18g。马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取小块g,加水0mL,煮沸20min后,过滤。在滤汁中补足水分到0mL,即成20%马铃薯煮汁。在汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。pH要求不严,可以不测定。
配方二:综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁0mL,磷酸二氢钾g,硫酸镁1.5g,葡萄糖20g,维生素10mg,1脂18g。先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH到6,分装,灭菌,备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
六蓝藻培养基BG-11培养基
母液1:NaNO,00mg/mL,NaCO,4mg/mL;
母液2:MgSO4·7H2O15mg/mL;
母液:CaCl2·2H2O;
母液4:柠檬酸(CA)1.2mg/mL,FeCA1.5mg/mL,Na2EDTA0.08mg/mL;
母液5:KHPO4·H2O8mg/mL:
母液6:HBO2.86mg/mL,MnCl-4H2O1.81mg/mL,ZnSO4·7H2O0.mg/mL,NaMoO4·2H2O0.0mg/mL,CusO4-5H2O0.mg/mL,Co(NO)2·6H2O0.mg/ml。
取母液1、2、、4、5各5mL,取母液61mL,加蒸馏水至0mL,调pH值为8。0.0BG-11固体培养基含琼脂1%。
来源:环凯转载于“发酵大师网”