深部真菌概述
1.深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。
2.真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。由菌丝和孢子构成。孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
2常用检查方法1、直接镜检：直接镜检的方法方便经济，可采用不染色的湿片如KOH涂片或乳酸酚棉蓝涂片。对浅表和皮下真菌感染最有帮助，一般在有菌部位发现大量真菌菌丝即可作出诊断，可在几分钟内完成，并且观察到的真菌形态可以提供有价值的临床信息。但是缺点在于阳性率较低，隐形结果也不能排除诊断。2、真菌的染色方法：①革兰染色：所有真菌真菌、放线菌均为革兰染色阳性，被染成蓝黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌及诺卡菌放线菌的感染。②吉姆萨染色可用于骨髓涂片和其他标本中荚膜组织胞浆菌和马内菲青霉的检测。用吉姆萨染色必须要有指控涂片。③PAS法：用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。
④六胺银法（GMS）:用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
染色结果：各种真菌均被着色，菌丝和孢子呈明显的黑褐色。背景为：橙黄色（橙黄G复染），红色（伊红复染）。
⑤银氨液浸染法（G-S）：染色结果：网状纤维及真菌呈棕黑色，胞核红色（核固红复染），胶原纤维黄棕色，胞质淡红色（伊红复染）。
⑥Gridley染色：此种方法菌丝或酵母染成暗蓝或玫瑰红色，组织深蓝，背景黄色。⑦粘蛋白卡红（Mayer’sMucicarminstain）染色：此种特殊染色方法可把组织中的新生隐球菌染成鲜红色。⑧巴氏染色法：巴氏涂片染色，特别是痰涂片，可以很好的区别双相真菌，机会性真菌，如烟曲霉等就很容易着色。以上就是目前较常用的临床上真菌染色的方法，其中，六胺银染色是显示真菌效果最佳的一种方法，并且能显示另外两种方法所不能显示的真菌结构，对真菌病的诊断具有确诊的价值
3各种真菌的镜下大致形态
1．新形隐球菌在镜下多呈圆形，直径为4-20微米，菌体周围有一层宽阔的具有折光性的胶质样荚膜包绕，荚膜厚3-5微米，为一种粘多糖物质所组成，爱先蓝染色和粘液胭脂红染色呈阳性反应。六胺银染色也能很好地显示菌体的特征，但必须掌握染色程度，显色太浅，隐球菌的夹膜不明显，显色太深，则分不清夹膜和菌体。2．组织胞浆菌病的感染途径是通过吸入荚膜型组织胞浆菌的分生孢子后感染所致的全身性真菌病，主要侵犯机体的网状内皮系统。组织胞浆菌病是一种典型的双相性真菌，在人体组织中是酵母型，大部分病变中均可在巨噬细胞内找到很多的病原菌。HE染色见菌体为小圆形或卵圆形，直径很小只有1-5um，有明显的细胞壁。PAS染色（首选）菌细胞壁阳性。六胺银染色也能清晰的见到病原菌，菌细胞壁呈黑色。3．马尔尼菲青霉菌是较罕见的真菌病，是已知唯一的双相性青霉菌，该菌在人体组织中酷似组织胞浆菌，其镜下是一种2.5-3微米的圆形或椭圆形酵母细胞，它所具有的特征性标志是腊肠形分隔的孢子。本病易与组织胞浆菌混淆：（1）组织胞浆菌在组织胞浆内呈淡蓝色核点，周围有空晕，但无“腊肠”状菌体、中部无横隔。（2）马尔尼菲青霉菌有双相性，即在不同温度下培养呈不同形态。25℃培养呈灰褐色绒毛状菌落，培养基呈玫瑰红色，镜下为菌丝相；37℃培养呈灰褐色粗糙的酵母样菌落，镜下为酵母相。（3）组织胞浆菌虽然也有双相性，但不产生红色色素。六胺银染色（首选）可以很好地显示出它的特征，但要熟练掌握好温度和时间，建议用橙黄G复染，这样底色清晰，能更好的发现椭圆形或腊肠状的菌体,中央有一着色较深较粗的横壁。（4）马尔尼非青霉菌的淋巴结组织不适合选用银氨G-S染色方法；PAS染色也很难发现椭圆形或腊肠形分隔的孢子。4．念珠菌为圆形或椭圆形生芽的酵母样菌，壁簿，由芽管延长而形成的假菌丝长而直，有分隔，少数有分枝，芽生孢子和假菌丝同时见到才可诊断为念珠菌，通常陈旧性病灶或病灶深部菌丝较多，而病灶浅部的孢子较多。六胺银法和PAS法都能很好地显示出念珠菌的孢子和假菌丝。5．烟曲霉的营养菌丝体由具有横隔的分支菌丝构成，在切片内有时可以清楚的看到孢子；分生孢子头短柱形，长短不一；分生孢子梗光滑，近顶端膨大形成倒立烧瓶状顶囊。顶囊有单层小梗，较长，黑棕色密集排列呈栅状，布满顶囊表面4/5。6．曲霉是较常见的一种真菌，营养菌丝体由具有横隔的分支菌丝构成，粗细均匀，两侧菌丝壁平行，有横隔，常呈45度锐角分枝，呈放射状或珊瑚状排列。曲菌常在组织空腔内大量繁殖，其菌丝缠绕在一起形成团块，称曲菌球。六胺银法、PAS法和银氨G-S法染色都能很好地显示菌丝体，营养菌丝体着色较深，反之着色较浅。7．毛霉菌主要侵犯肺，脑和其它器官,最常侵犯血管引起血栓形成和血道播散，毛霉菌菌丝粗大,壁厚，两侧壁不对称,宽窄不均,不分隔,菌丝偶有分枝而不规则,呈钝角或直角分枝,有时菌丝可呈直管状,有些又像枯枝状。用六胺银法、PAS法和银氨G-S法都能很好地显示毛霉菌菌体。8．放线菌按生物学分类属于细菌，有细胞壁，其化学组成与细菌相似；由于所引起的病变与真菌相似，故多把它归为真菌类介绍。近年来，由于临床上大量使用广谱抗生素、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂及进行大量的放疗，其结果造成机体内菌群失调和菌群交替，使作为条件致病的放线菌引起的机会性感染发病率急剧上升。放线菌的菌落由大量菌丝交织而成，周边部分菌丝成放射状排列，故称为放线菌。H-E染色中可见放线菌丛（肉眼观察为硫磺样小颗粒）。菌丛中央由交织成团的菌丝构成，呈紫蓝色，周边部分为放射状排列的菌丝未端，呈棒状膨大和红染。革兰氏染色阳性。六胺银染色能把菌丝和胶样鞘都显示出来。放线菌常侵犯人的颈面部，腹部和胸部亦可侵犯肠壁、肝和肺。
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