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菌种保藏方法这几种你都会了吗

菌种保藏是指保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术,其目的是把菌株的原始性状和优良性状保存下来,防止菌种死亡、退化或杂菌污染。菌种保藏方法很多,现简单介绍几种:

1.传代培养保藏法

此法为实验室常用的保藏法,包括有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等,培养后于4-6℃冰箱内保存。其中斜面培养法是将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上,待菌充分生长后,棉塞部分用油纸包扎好,移至2-8℃的冰箱中保藏。保藏时间依微生物的种类而有不同,霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月,移种一次。酵母菌两个月,细菌最好每月移种一次。

2.液体石蜡法

这是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。选用优质纯净的液体石蜡,经℃高压灭菌2h,然后℃干热处理1~2h,以除水分,冷却后加到斜面上,覆盖以超过斜面为宜。菌种用的试管塞为橡皮塞,并用蜡封上,放阴凉室温处即可。此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1-2年,一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。

3.砂土保藏法

其原理是干燥条件下微生物菌种代谢活动减缓,繁殖速度受到抑制。此法可减少菌株突变,延长存活时间,是现在抗生素发酵工业生产中较常用的菌株保藏方法。适用于产芽孢的细菌、放线菌和真菌、可保藏5~7年,不适用于病原性真菌的保藏,特别是不适于以菌丝发育为主的真菌的保藏。

 4.真空冷冻干燥法

这是菌种保藏比较理想的一种方法,适用于千多种细菌和放线菌。在多数情况下,也适用于真菌、酵母、病毒、噬菌体、立克次氏体。冷冻干燥保存的菌株存活时间长,效果好,一般菌种可保存5年以上,有的可保藏15年以上不发生变异。还具有体积小、不易污染、便于输送贮存方便的优点。

5.液氮超低温保藏法

用-~-℃的液氮超低温保藏菌种,是现在菌种保藏中使用的一项先进技术。与冷冻干燥保存一样,液氮保存菌种也需要有保护物质,可以用10%的甘油,使用方便,效果好,对于有些对甘油敏感的菌,可选用其他类保护剂。使用液氮超低温法保藏菌种时,操作者要戴皮手套或棉手套,严防液氮飞溅伤人;取菌种时,要垂直轻取盖塞,再垂直提起提筒,轻轻移到容器中取物。取毕立即将提筒与盖塞复位,以防空气中氮气过浓引起窒息。

 注意事项:

无论采用何种保藏方法,首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,最好保藏它们的休眠体,如分生孢子、芽孢等。其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧,另外,避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。

文章来源:锐德安正

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