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微孢子虫疾病的前世今生养殖户不可多得的

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微孢子属于孢子内寄生虫,具有微小的孢子。微孢子寄生于许多甲壳类、昆虫、吸虫中,其中有多个品种通常寄生在虾身上,并导致感染疾病。

一、微孢子概述

微孢子虫结构特征:微孢子的身体结构很简单,外有基丁物质形成的膜,有孢子状的囊肿,里面有极丝。

图1:年,研究人员发布的微孢子结构。

图:微孢子发育周期

二、虾身上微孢子虫引起的疾病

1、微孢子的流行史

-年在泰国(根据KanokpornChayaburakul,年)发现养殖斑节对虾出现严重的缓慢生长疾病,其病原体是由一种寄生在胰腺肝脏的微孢子。年,该病造成近3亿美元的损失。

年,据SomjintanaTourtip和CTV报道,虾胰肝中致病微孢子是寄生内孢子(Enterocytozoonhepatopenaei)。

虾肝肠胞虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)微孢子被确定寄生在虾肝上。从无性孢子合生到成年孢子的阶段,都寄生在管状胰腺肝细胞(宿主)的细胞中。有许多无性孢子核直接粘附在细胞物质上,在虾细胞表面含有大量的小颗粒(Bleb)。

小孢子有丝分裂繁殖发生在寄生虫发育的早期阶段,寄生虫细胞内形成大量的孢子母细胞。致密圆盘和丝状前体在寄生虫早期的细胞质中生长,从受精卵表面形成原孢子。孢子椭圆形,大小0.7x1.1μm,单核,囊肿前有5-6环丝状体,后有液泡,囊肿尖端有圆盘状附着于丝状体,细胞壁薄而致密。

细胞壁由质膜、约10nm厚的发光细胞内层和约2nm厚的细胞外致密层组成。设计用于扩增寄生虫SSUrRNA基因组DNA片段的引物在genbank(GenBankFJ)上的大小为bp。的核苷酸序列显示出84%的同源性,扩增的片段序列与Enterocytozoonbieneusi相似。

根据结果的特性,该寄生虫属于肠细胞虫科。虫细胞质和SSUrRNA序列不同于E.bienseusi为16%,因此该寄生虫被认为是Enterocytozoon属的一个新品种。

2、微孢子病理迹象

状态:生病的虾活动缓慢,游到池塘边,死亡(图2)。虾的死亡率迅速增加,1-2周内虾死亡60-70%,如果虾病重,死亡率可以高达%。

外部迹象:患病的虾没有典型的疾病迹象,通常虾具有生长缓慢和分群(图3)。

内部迹象:疾病轻微感染时,没有明显的症状,严重时,虾胰肝坏死严重,当虾的体质虚弱,那么肝胰腐烂非常快。

病理组织的迹象:胰腺肝管模型大部分坏死(空心),并含有大量的脂肪滴(图4)。大张管模型上的一些细胞充满了小颗粒(图5,6,7,8)

图2:虾游到岸边死亡(年8月样本)

图3:病虾慢大,分群(年8月)

图4:虾胰肝细胞中,成熟的孢子充满小颗粒。

图5:虾胰肝中的成年孢子。

图6:肝胰坏死。

图7:胰脏肝管细胞张大,充满小颗粒(HE染色,年8月)

图8:胰脏肝管细胞张大,充满小颗粒。

3、微孢子病原体

病原体在一些养虾场初步调查,确定它们类似于肠细胞虫属肠细胞虫科的小孢子,它们是细胞内寄生虫。

成熟孢子的革兰氏染色在黑虎虾肝胰腺细胞的细胞质中呈现紫色(图9,10)。

成人孢子电子显微镜垂直切成椭圆形,尺寸为0.60x1.86μm,前面有囊性极(PP),前端为粘附盘(ad),后面有液泡(PV),中间有1个核(N),上两侧有细丝(pf)(图10-11)。孢子阶段在宿主细胞质(肝胰腺细胞)中发育,宿主细胞表面含有许多小颗粒(泡)。

图9:虾胰肝中的成年孢子

图10:虾胰肝中的成年孢子

图11:孢子切椭圆形,正面有有囊性极(PP),前端有附着盘(ad),后面有液泡(PV),中间有1个核(N),两侧杆有细丝(pf)。

图12:虾胰肝管表皮细胞中的成熟细胞

4、微孢子虫疾病的分布

微孢子寄生在许多甲壳类动物中,目前已描述的品种:八孢虫、匹里虫、单极虫、Enterocytozoonhepatopenaei等50多种,分别在30种海水虾中(包括:南美白对虾、斑节对虾等),淡水虾,螃蟹和龙虾中发现。此外,微孢子寄生在昆虫,吸虫当中。

根据(SomjintanaTourtip等人,年)的研究,泰国发现微孢子虫寄生在斑节对虾(Penaeusmonodon)的肝胰腺中;(M.Toubiana和ctv,)的研究显示:马达加斯加三种虾(印度明对虾、斑节对虾和短沟对虾发现微孢子虫;(GDStentiford等人,)的研究显示,螃蟹身上发现微孢子虫病(Enterosporacanceri)。

初步调查表明,微孢子虫可以感染虾苗,在投苗后20天到天内,都可能出现疾病。当天气波动时(如:降雨、气温变化、水环境污染),这种疾病经常出现。

三、微孢子疾病的诊断和预防方法

1、微孢子疾病的诊断方法

-病理组织方法:革兰氏染色法、吉姆萨染色、HE染色

-电子显微镜检查。

-分子生物学方法:SSUrARN基因组的DNA扩增技术

2、微孢子疾病预防方法

微孢子属于孢子寄生组,它们有相当稳定的的外壳,因此很难使用治疗药物,因此主要措施是预防养殖虾的疾病,基于以下原则:

-从环境中杀死病原体:使用TCCA在池塘底部和水环境中杀死病原体;使用微生物制剂清洁环境,减少换水量,防止病原体从外部环境进入,如果换水必须从经过消毒的沉淀池中取水。

-增加对虾的抗病能力:服用一些微生物制剂(β-葡聚糖、维生素等)喂虾,增加对养殖虾的抗病能力。

-修复虾肝胰腺坏死:服用多氨基酸、酶、多维生素、多种微量元素等药物,快速恢复虾的肝胰腺。




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