杭州迪安微生物室
检验技术员肖贝贝■
Fungus
或许提到真菌，很多人会露出疑惑的表情，但其实真菌在我们生活中四处可见，真菌引起的感染也司空见惯。想知道真菌和真菌感染到底是怎么回事吗？让我来带你走进它们的世界。
什么是真菌与真菌感染？
Whatisfungusandfungalinfection？
真菌(fungus)：是一种真核细胞型生物，最常见的真菌是各类蕈类，另外也包括霉菌和酵母菌。
真菌感染（fungalinfection）：对人类有致病性的真菌有多种。医学上有意义的致病真菌几乎都是霉菌和念珠菌。根据对人体不同部位的危害，临床上将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌仅仅侵犯皮肤、毛发和指甲，而深部真菌能够侵犯人体皮肤黏膜、深部组织和内脏，甚至会引起全身播散性的感染。
不同的真菌感染表现如下：
浅表真菌病：感染仅仅局限于皮肤角质层的最外层，主要包括：花斑癣、掌黑癣和毛结节菌病。
皮肤真菌病：足癣(俗称"脚气")、手癣（灰指甲）、体癣、股癣、甲癣以及头癣等各类癣病，痛痒难耐，令很多爱美人士无法光彩照人。
皮下真菌病：感染皮肤、皮下组织，包括肌肉和结缔组织，一般不会经血液流向重要脏器播散，严重者导致肢体畸形，累及全身脏器。
系统性真菌病：除侵犯皮肤和皮下组织外，还累及组织和器官，甚至引起播散性感染，又称为侵袭性真菌感染，主要包括念珠菌病、曲霉病、隐球菌病、接合菌病和马内菲青霉病等。
真菌感染拥有以下特点：两高、两低、一快、一慢。高临床感染率、高死亡率、低临床检出率、低实验室检出率、病情进展快、治疗过程慢！
那么真菌感染如何检测呢？
如何检测真菌感染？
Howtodetectfungalinfection？
真菌感染实验室检测方法主要有：涂片培养法及血清学方法。
一、涂片与培养检查及临床应用
1.真菌涂片检查
1.1直接镜检：是最简单而重要的诊断方法。鳞屑、菌痂、病甲、毛发等标本采集后，将标本置于载玻片上，加1滴10%氢氧化钾溶液，盖上盖玻片，微微加温，避免煮沸，驱逐水泡，轻轻压薄成云雾状，吸去溢液，先置低倍显微镜下观察找到菌丝和孢子后，再用高倍镜证实。菌丝在镜下粗细一致，绿色折光，有分隔，胞浆均匀，胞浆内可见大小不等的颗粒，孢子多为圆形或卵圆形，大小一致，可见孢浆内结构。
1.2革兰氏染色镜检：取一块洁净载玻片，滴一滴75%生理盐水于载玻片中央，按无菌操作要求，将采集后的标本或纯培养物均匀涂布在载玻片上，等待自然干燥后，火焰固定，然后进行革兰染色，待玻片干燥后进行镜检，油镜下观察，所有真菌革兰染色均为阳性，菌体呈蓝紫色。本方法适用于白色念珠菌、孢子丝菌等。
1.3墨汁染色镜检：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。方法是取一小滴墨汁与标本(如脑脊液)混合，盖上盖玻片后直接镜检。
1.4棉兰染色镜检：通常采用透明胶带法，利用胶带先粘一定量菌丝转移至玻片上，再滴加酒精进行脱胶，滴加棉兰染液，最后盖好盖玻片，显微镜检。
2.真菌培养及鉴定
2.1影响真菌检出的因素：
（1）培养温度：临床常见绝大多数真菌最适生长温度为30℃，如果实验室没有30℃的培养箱，也可将培养物放于室温培养（25℃）。当怀疑有双相真菌(如马尔尼菲菌）感染时,应同时在28℃±1℃及35℃±1℃培养。一些霉菌可以在较高温度下生长，如烟曲霉可耐受55℃，根毛菌属可在54~58℃生长，利用不同的生长温度可以实现种间的辅助鉴别。
（2）培养时间：真菌的培养时间较长，一般至少生长48h。对于绝大多数真菌应在培养5天后无检出，方可认为培养阴性。对于组织、脑脊液等标本或怀疑罕见真菌或慢生长真菌(如荚膜组织胞浆菌、隐球菌)感染时,建议至少培养1个月。培养最初的几天每天都要观察一次。
（3）培养基：真菌常用的培养基种类众多，迪安检验实验室常用的就是沙保罗琼脂和念珠菌显色琼脂，另外还有脑心浸液琼脂等。
（4）其他因素：适当的湿度也是真菌生长的必要条件，真菌培养箱应保持在60%以上湿度，为避免因长时间的培养导致培养基失水干燥而影响检出率。另外，真菌标本的采集同细菌一样，尽可能的在患者用药前采集，否则也会影响检出率。
2.2临床一些常见致病菌的鉴定：
（1）真菌显色培养基鉴定。根据念珠菌在念珠菌显色平板上呈现的绿色、蓝色、紫色、粉色、无色等可简单进行分类。绿色菌落提示白色念珠菌，蓝灰色菌落提示热带念珠菌，粉红色、边缘模糊有微毛刺菌落提示克柔念珠菌，中央为紫色湿润的菌落提示光滑念珠菌，白色菌落提示近平滑念珠菌。
（2）形态学鉴定：霉菌可大致根据形态学进行菌属区分。
曲霉菌为条件致病菌，大多数为空气中的污染菌，常引起干细胞移植、器官移植和化疗者感染，主要侵犯支气管和肺、以及皮肤、眼和耳等器官。图片中为几种常见致病性曲霉菌。
镰刀菌于镜检中呈镰刀状，可以引起由于创伤、隐形眼镜污染引起的角膜炎、甲真菌病、肺炎、鼻窦炎、关节炎等。对于免疫抑制剂患者，可引起真菌血症、脑脓肿和全身散播性感染。
马尔尼菲篮状菌是一种致病性真菌，生物危害等级三级，起病急剧，常引起患者寒战、发热、咳嗽、腹泻、白细胞增多、贫血、肝脾肿大等，最终因衰竭而亡。素有“最恐怖的真菌”的美称。
（3）仪器鉴定：目前实验室在用为梅里埃VITEK2Compact全自动细菌分析仪及质谱检测仪M-Discover。
二、真菌的血清学检查及临床应用（真菌六联检）
1.真菌血清学检查
1.11,3-β-D-葡聚糖检测(G试验)：侵袭性真菌感染时真菌生长释放出可溶性细胞壁成分1,3-β-D-葡聚糖,可与鲎试验中G因子发生级联反应，从而通过动态比浊法或动态比色法，检测标本中葡聚糖含量。
1.2曲霉菌半乳甘露聚糖检测(GM试验)：半乳甘露聚糖是曲霉特异性细胞壁成分,由菌丝在组织中生长时释放出来,GM试验利用双抗体夹心法或竞争法,与半乳甘露聚糖的1,5-B-D-呋喃半乳糖苷侧链结合,检测标本中半乳甘露聚糖含量。
1.3隐球菌抗原检测：利用乳胶凝集法和酶联免疫吸附等测定方法检测样本中是否含有隐球菌荚膜多糖抗原。
1.4念珠菌甘露聚糖检测：利用ELISA竞争法，使用特异抗体检测念珠菌甘露聚糖抗原。
1.5念珠菌IgG抗体检测：利用酶联免疫技术检测血清中的特异性IgG抗体，用于念珠菌血症的辅助诊断。
1.6烟曲霉IgG抗体检测：通过检测血清样本曲霉特异性IgG抗体含量，辅助诊断深部曲霉感染。
2.血清学检查的临床应用（见图）
2.1侵袭性真菌感染：
2.2真菌感染5G+时代：
（图由天津丹娜提供）
以上就是有关真菌和真菌感染的一些科普知识，浏览过它们的世界后，你是否对真菌有了更深刻的了解呢？
杭州迪安肖贝贝供稿
