讲者：王澎，医院
嘉宾：陈知行，医院
钱雪琴，上海公共卫生中心
吴庆，温州医科大学一附院
王山梅，医院
主持：李轶，医院
邓飒兵，医院
徐和平，厦大一附院
1、马儿和曲霉菌丝怎么区别？
如果在直接的临床标本中（体内）。马内菲是酵母样的孢子，而曲霉菌是分枝分隔成45度角的菌丝。如果在体外28度培养物中的菌丝是没有特殊的区别点的。但是菌落成熟后，马内菲可以见到帚状枝而曲霉可以看到曲霉头。
你问的应该是体内的标本中的区别吧。
2、请问老师灰绿曲霉和浅蓝灰曲不是一种菌吧？
浅蓝灰曲（Aspergullusniveus）和灰绿曲霉群（Aspergullusglaucus）不一样的。
3、丝状真菌药敏咋做？
上讲，杨启文老师专门讲了真菌的药敏。
4、痰培养真菌定值问题，不知道王老师怎么看？
痰中培养出新生隐球菌外的酵母菌，临床意义有限，多数为不致病菌；培养出接合菌或曲霉、青霉等条件致病真菌，首先要结合标本直接涂片排除实验室污染，多和临床医生沟通，决定是否为定植；培养出组织胞浆菌、马尔尼菲青霉、皮炎芽生菌、粗球孢子菌、副球孢子菌，一般考虑为感染。
5、想问一下老师，现在鉴定某些真菌有没有pcr的方法了呢？
有，有许多致病真菌或者是常见的真菌都有成熟的探针。
6、王老师，您好。我想请问您，丝状真菌的产孢方式，除了显而易见的几种，我们在显微镜下怎样更好的观察它是何种产孢方式？
做小培养，如果实在看不清楚就用油镜或相差显微镜。
7、马内菲在菌丝相会出现螺旋状菌丝吗？
没有查到过相关的文献，但是实际工作中确实见过马菲呈螺旋状的菌丝，但是随着培养时间的延长螺旋菌丝又会恢复
8、王老师好！请问浅部真菌培养用的SDA要加放线菌酮吗？如果加的话一些腐生菌比如曲霉菌等会被抑制，就会漏检一些致病菌，比如曲霉菌所致的甲癣
还是应该加放线菌酮抑制污染的霉菌。曲霉所致的甲癣很少。我们还是应该首先考虑常见的。
9、对生，轮生，环痕，着生几词能解释下吗
课件里很清楚。可以再仔细看看。
10、王老师，详解一下旗帜法好吗？每次用胶带粘都有气泡
1、取约1.5CM长的透明胶带，胶带的宽度要小于培养基管口，
2、粘在长度为15CM左右的竹签一端，使黏的一面朝下，
3、将胶带粘面压在菌落表面，竹签反转压在胶带上，小心由菌落表面拉离，
4、在竹签顶部加一滴75%的酒精，目的是使胶带易于与竹签分开，
5、将胶带黏在含有一滴乳酸酚棉兰染液的载玻片上，
6、低倍镜观察，高倍镜或油镜确认。
此法使用于斜面和平板培养基上丝状菌落的取材。优点是真菌结构保持比较完整，镜下易于找到典型结构，缺点为操作稍复杂，取材多样性方面不如手指胶带法。
11、王老师，马内菲青霉菌、马尔尼菲青霉菌、马内菲蓝状菌都是指同一种真菌，请问这几个名称变更有何意义，为啥更名？
是同一种真菌。前两个名字是因为音译的差别。马内菲蓝状菌是因为分类地位变了，调整到蓝状菌属（Talaromyces），所以属名变了
12、王老师好！请问痰标本涂片见到鹿角状分隔菌丝是报曲霉还是丝状真菌比较合适！谢谢
报告曲霉，因为肺部曲霉最常见。如果报告丝状真菌临床用药会有顾虑，不知道该用哪种好？
13、请教老师，旗帜法做压片时，加酒精是为了胶带容易脱落，还是也可以减少气泡产生？
你说对了，两种作用都有。
14、丝状真菌染色是用什么染液染出来的，我们做真菌尽限于念珠菌
乳酸棉酚兰。BASO有卖的。其实用抗酸第三液美兰也可以，简单经济实惠，用抗酸第三液时，染色有时会比较蓝，可以摸索个合适稀释度。
15、放线菌酮有毒性，这个量要多少？
培养基配方里有具体的量。每ml培养基加0.5g放线菌酮。
16、王老师，真菌培养箱和生物安全柜平时都是怎么消毒的？75%乙醇对孢子有作用吗？
建议用5%的石碳酸或0.5%的过氧乙酸消毒檫拭，75%乙醇对孢子无作用。复杂的安全柜消毒我曾经用过高锰酸钾+甲醛熏蒸，效果很好，但是很刺激。紫外线是不能有效杀灭真菌的。
17、老师有见到断发毛癣菌产生螺旋菌丝的么？
断发毛癣菌为球拍状菌丝。螺旋菌丝可见于絮状表皮癣菌和石膏样毛癣菌。
18、犁头霉现在都更名为横梗霉了吗？
是的。
19、老师想问一下昨天在一呼吸科病人，男，61岁，诊断支气管肺炎，HIV阴性，在合格痰内培养出马尔尼菲青霉3+，可以诊断吗？有必要复检吗？
他肝脾大吗？是否有骨骼受累？皮肤受累？还是仅仅局限在肺部？患者有其他基础疾病吗？如果都没有可以考虑定植或污染的可能。如果不是要警惕。
痰中培养出马尔尼菲青霉，应该可以认为是致病性真菌。
20、手指法怎么做？能详细介绍一下吗？
手指胶带法
1.加一滴乳酸酚棉兰染液于载玻片上。
2.取约4CM长的透明胶带。
3.使其粘于拇指和食指之间，形成弧形，使黏的一面朝下。
4.紧压菌落表面，小心由菌落表面拉离。
5.紧贴玻片，两手指向反方向分开，将胶带粘在载玻片上。
6.低倍镜观察，高倍镜或油镜确认。
注意事项：
a.此方法适用于平板培养基上丝状真菌菌落的粘取，取材多，全，保留了孢子和菌丝原来连接的完整性，接近小培养的特点，若镜检真菌不在一个观察层面时，推荐另取一张玻片平行压在透明胶带上，稍压一下，弃去该玻片。
b.需要乳酸酚棉兰染液作为载液，若使用蒸馏水或生理盐水，易形成黑头现象，不易清楚观察到真菌的结构。
c.气生菌丝短、膜状、皮革样丝状真菌推荐小培养方法镜检。
d.最好选用稍厚实一点的胶带，太软时向下粘菌落，力度不够，粘的菌量少。
e.胶带的宽度稍小于载玻片的宽度。
21、鉴于生物安全，王老师提到的马菲和粗球孢子菌不要做小培养，马菲很容易辨识，其他几种就难判定了。我们实际操作中怎么预防？
这个很难。就好像你不知道这个是布氏杆菌你怎么预防？这样的病人通常都开始有明确的组织病理诊断，这就是初步结果。你就不需要再冒险了。也许以后研究出来可以放在生物安全柜里的显微镜，我们可以在里面做，在外面看。
22、王老师如何保存真菌菌株？
最好的方法就是真空干燥低温冻存。国际菌株保藏机构都是这种方法。我们的方法有一个非常大的问题就是污染。
①将生长的斜面直接放在一10℃冷冻库，表皮癣菌和许多接合菌纲(Zygomycetes)菌种不可用此法保存。
②蒸馏水保存法:将生长在马铃薯葡萄糖培养基上的霉菌(培养数天一2星期)，刮取菌丝体、芽饱或酵母细胞，或利无菌蒸馏水冲洗斜面表面，再以吸管吸取放在无菌小管中，密封阻止蒸发，置于室温保存。
③另一种方法为直接加无菌矿物油至霉菌生长的琼脂斜面，至少可保存半年以上。
23、请问各位老师一个问题，微生物血培养瓶厌氧菌报警之后该怎么处理，直接报厌氧菌感染还是再做鉴定？
当然是先做鉴定了，厌氧瓶报警的也可以是兼性厌氧菌啊，如大肠，肺克，肠球菌菌，链球菌都厌氧生长。可以一级报告血培养阳性，同时做需氧培养和厌氧培养。需氧长了，就先做需氧菌的鉴定和药敏。厌氧培养基要放够5天。为什么这样做，就是防止有需氧和厌氧菌两种菌混合生长。厌氧培养基的菌落先做耐氧试验，确实有氧环境不生长了再去做厌氧菌的鉴定。是否听明白了？
24、脚趾甲培养出镰刀是污染还是致病？
要看临床。例如真菌性足菌肿可以是镰刀菌的感染。结合直接涂片。
25、老师们，血培养中可能培养出哪些丝状真菌？哪些是污染的？
血培养阳性的丝状真菌主要有组织胞浆菌，马内菲蓝状菌，镰刀菌，念珠菌，隐球菌，毛孢子菌，赛多孢，我们眼球组织（研磨后打入血培养瓶）里曾培养出紫色拟青霉。腹水打入血培养瓶培养出棕黑腐殖霉。文献报告皮炎芽生菌和伊蒙菌、球孢子菌都可以从血培养里培养出来。
烟曲霉是污染的。有报告土曲霉的心内膜炎患者外置血培养出来土曲霉（JClinMicrobiol.Nov;36(11):-51.）
26、请问王澎老师，你们实验室用质谱鉴定常见曲霉的成功率高吗？
我觉得似乎没有看形态看的准和快。直接镜检对于常见的菌还是最快捷简便的方法。
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