隐球菌病的实验室检测
一、隐球菌概述
隐球菌病是一种由隐球菌感染引起的深部真菌病，可累及全身多个系统。隐球菌属内对人致病的最主要病原菌是新生隐球菌（Cryptococcusneoformans）和格特隐球菌（Cryptococcusgattii）。根据新生隐球菌荚膜多糖成分和生化方面的差异，将新生隐球菌分成2个变种（新生隐球菌新变种C.neoformansvar.neoformans和新生隐球菌格鲁比变种C.neoformansvar.grubii），按血清学分为A、B、C、D和AD型5个型。其中新生变种为血清D、AD型，欧洲、南美洲流行；格鲁比变种为血清A型，全球流行；格特隐球菌为血清B、C型，在热带\亚热带\温带流行；我国血清型主要为A型。此外，还发现了新生变种与格鲁比变种的杂合体（血清型AD）。隐球菌的基因型包括新生隐球菌的VNⅠ、Ⅱ、Ⅳ、B和格特隐球菌的VGI-VGIV。
两种隐球菌的无性繁殖体均为无菌丝的单芽孢酵母菌,在体外为无荚膜或仅有小荚膜,进入人体内后很快形成厚荚膜,有荚膜的隐球菌菌体直径明显增加,致病力明显增强。隐球菌荚膜的主要成分荚膜多糖是确定血清型特异性的抗原基础，并与其毒力、致病性及免疫性密切相关。隐球菌是一种机会感染性真菌，既可侵犯免疫力低下及免疫缺陷人群，也可发生于免疫正常者，可以感染人体的任何组织和脏器，最常见的部位是中枢神经系统，其次是肺部和皮肤。
二、隐球菌实验室诊断方法
1、检验方法一：真菌直接镜检
墨汁染色是目前最常用的检查，该方法可以快速、早期诊断隐球菌病。对样本进行离心可以增加镜检的灵敏度，但是淋巴细胞溶解所产生的伪粒子可以造成结果的假阳性，髓小球、脂肪小滴、组织细胞同样可以造成假阳性结果，且涂片结果并不能反映临床疗效，因此具有一定的局限性。
2、检验方法二：血清学检测
检测血清或体液中的荚膜多糖抗原是目前最常用的血清学方法，目前市售乳胶凝集反应试剂盒可以检测出10ng/mL的荚膜多糖抗原，该类试剂盒的敏感性和特异性因标本的种类不同而稍有差异。类风湿因子是造成假阳性最主要的原因，而前带效应被认为是脑脊液胶乳凝集反应假阴性的最主要原因。
隐球菌荚膜多糖抗原检测试剂血清样本类型在临床应用中，仅根据该结果阳性无法判定感染的部位，其预期用途限定在隐球菌性脑膜炎的辅助诊断。
3、检验方法三：真菌培养和鉴定
真菌培养和鉴定是诊断隐球菌病的金标准，通过48～72h的培养，阳性标本即可见菌落形成，但系统性抗真菌治疗的患者需要更长时间才可见菌落形成。真菌培养往往会因为菌量过低或活力不佳而容易出现假阴性结果，对标本进行离心后培养可以提高阳性率。另外，支气管分泌物、尿液标本等通常存在其他微生物的污染，杂菌的快速生长会抑制隐球菌的生长而干扰结果的判断。
文字：微生物室成员
编辑：刘海萍
审核：徐焰、王永锋
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