样本库收集的生物样本包含各种类型的DNA/RNA、蛋白质、细胞、组织水平信息。应根据研究需要选择所保存样本的类型,如:活组织、冰冻组织、石蜡包埋组织等。研究者应实现确定样本来源的患者类型,排除干扰因素,如:年龄要求、性别要求、激素水平、是否为转移病灶、是否术前有放疗化疗史、·是否有其他药物史。
02建立SOP和实验室标准管理体系所有技术人员应接受统一的SOP培训,安排专职人员负责样本的运输、处理、保存和信息维护。设质量控制人员定期对技术人员进行考核并及时更时更新SOP。
03安全保障严格防范体液和血液传播疾病,如乙肝、丙肝、HIV、汉坦病毒、肺结核、人嗜T-淋巴病毒、球孢子菌病、克雅氏病等各种已知和未知病原体。如乙肝和HIV病毒室温仍可存活1周,应技术人员应接受乙肝病毒免疫。实验区内应配备个人防护措施,如防护面具、防溅服和防护鞋。技术人员应定期健康检查,实验废弃物应该规定处理后丢弃。
04样本取材前手术前联系临床医生和病理医生,协商、安排好样本处理程序。提前准备好所需耗材和试剂。另外,提前准备样本信息记录单,应包含以下信息:患者姓名、性别、出生日期、肿瘤位置、活检位置、活检日期、组织类型(正常组织或肿瘤组织)、样本收集量、样本类型(活组织、冰冻组织等)、病例号、病理活检编号、切片编号、冻存编号、保存位置、主治医生、医院、热缺血时间、冷缺血时间、使用试剂类型和时间。如研究须获得患者同意和患者联系方式,应准备知情同意书。
05样本取材
经病理医生或主治医生确认后,手术室中收集活检多余的肿瘤组织或正常组织。多余的肿瘤组织应取材于肿瘤中间部分或者肿瘤外缘部分,正常组织应取材于远端非肿瘤部分和肿瘤周围部分。整个取材操作注意无菌。快速冰冻组织取材大小应修剪到0.5*0.5厘米大小以内。如果需要从组织内获得活细胞,组织大小应不小于1*1厘米。
06样本运输获得样本后应立即送往实验处理。尤其是快速冰冻组织最好10分钟以内处理,研究涉及RNA和转录后蛋白的样本最好30分钟以内处理。若客观原因导致不能以最快速度处理样本,应无菌包装在组织样本容器中以4℃短暂运输和保存。注意最好用碎冰,而不要用低温人造冰盒。也可以使用商业化保存液,它们通常可以保存样本几个小时,使RNA或蛋白不易降解。
07样本处理应严格控制样本处理前的等待时间。尽可能按SOP规范化处理,如果无法标准化控制,应详细记录样本送达时间、开始处理时间、结束处理时间的信息。
注意冰上操作,防止组织自溶,所有实验过程应严格区分所用耗材,避免正常组织和组织的污染,以及不同样本来源的污染。
当样本来源有限时,按以下优先次序处理和保存样本:活肿瘤冻存的组织/新鲜快速冰冻的组织、福尔马林固定的组织、OCT包埋冷冻的组织、RNA稳定剂处理的组织。
08样本保存根据样本类型和需要的保存时间选择合适的保存方法,如-20℃、-80℃、气相液氮。在冻存管上标记样本信息,推荐使用条形码系统储存样本信息,确保每个样本的详细信息都有迹可寻。
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