实验五、酵母菌和霉菌形态的观察
一、实验目的及内容
目的：1、了解霉菌的形态
2、观察并掌握酵母菌的个体形态
内容：1、学习自制水浸片观察霉菌的形态
2、通过制作美蓝浸片观察酵母菌的形态特征
二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3—10μm)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列三种：
直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。用此染液制成的霉菌制片的特点是：细胞不变形，具有防腐作用。不易干燥，能保持较长时间；能防止孢子飞散；染液的蓝色能增强反差。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。
载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养。霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态．还便于观察不同发育期的培养物。
玻璃纸培养观察法：霉菌的玻璃纸培养观察方法与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似。这种方法用于观察不同生长阶段霉菌的形态，也可获得良好的效果。
三、实验材料及用具
1、菌种：霉菌平板、酵母菌平板
2、培养基：查氏培养基、PDA葡萄糖培养基
3、溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液、0.1％吕氏碱性美蓝染色液
4、仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、载玻片、盖玻片、解剖针、胶头滴管、接种环、镊子、培养皿
四、操作步骤
1、霉菌直接制片观察
(1)在载玻片中央加一滴乳石碳酸棉蓝染色液，然后按无菌操作的方法用解剖针挑取少量菌丝放在染液中，分散均匀。
(2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
(3)将制片放置几分钟后镜捡，先用低倍镜然后用高倍镜观察霉菌的气生菌丝的特化形态。
青霉显微图40倍
2、酵母菌水浸片观察
(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。
(2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
(3)将制片放置约3min后镜捡，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况并根据颜色来区别死活细胞。
(4)染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
五、注意事项
1、霉菌直接制片观察中，挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时切勿压入气泡，以免影响观察。
2、酵母菌美蓝浸片的制备中，染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
六、作业
1、画出霉菌的个体形态图，并注明各部位名称。
2、画出酵母菌的形态图，并注明各部位名称。
