Chelex-：15分钟快速提取菌物基因组DNA用于PCR扩增
本教程可在15min左右快速获得菌的基因组DNA，然后直接加样进行目的基因（ITS，28S，18S，β-tubulin，CHS1，ACT等）PCR扩增。
敲黑板啦！今天小编向大家详细的介绍我经常用的一种快速提取菌物基因组DNA然后进行基因序列扩增的方法。
注：这种方法超级节省时间，强烈建议那些需要提取很多样本的同学们尝试这种方法提取，哈哈~你们一定会有很大的感慨，一定会爱上这种提取方法的。
就我所知大多数想要扩增自己手中的菌物基因的同学们都采用DNA提取试剂盒进行基因组DNA的提取。因为他们认为试剂盒提取与CTAB法提取相比，前者提取速度快，能节省很多时间。
但是小编认为如果你只是想扩增一下目的菌株的某些基因片段，Chelex-法是非常简单和快速的方法，只需粘取一些孢子或菌丝，然后水浴两下就可以吸取少量提取液直接进行PCR反应了。
图片来源于网络接下来小编就给大家详细介绍一下如何采用Chelex-方法提取菌物基因组DNA，进行各种基因序列的PCR扩增。
在介绍这种方法之前，小编觉得很有必要让大家在整体上对这种方法有一个认识，那就是如上文所述，这种方法只需粘取一些孢子或菌丝放到Chelex-溶液中，然后水浴两下就可以吸取少量提取液直接进行PCR反应了
（关于这种提取方法的原理，大家可以在网上搜索一下，这里小编就不再详述了）。注：提取时用的是浓度为5%的Chelex-悬浮液（因为Chelex-是微笑的颗粒状的，在溶剂中是不融化的）。
5%Chelex-微量提取菌物基因组DNA的详细步骤如下：
配制浓度为5%的Chelex-悬浮液：5%代表的是质量和体积比，也就是说称量5gChelex-颗粒加入到ml的ddH2O中，因此我们可以称量0.5gChelex-颗粒加入到装有10mlddH2O的大离心管内，这样就配制的就是5%的Chelex-提取液了（配制完后，可以放4℃冰箱保存备用）。
粘取真菌的孢子或菌丝：这一步操作需要准备粘胶带（超市购买小卷的粘胶带）。然后在室内试验台上的酒精灯旁将胶带用剪刀剪出大小为1到2mm的小块；然后用灼烧灭过菌的镊子夹着小胶带在培养皿内粘取孢子或菌丝；接下来把粘有孢子的胶带放入1.5ml的灭过菌的离心管内。
加5%的Chelex-提取液在装有小胶带的离心管内加入50微升5%的Chelex-提取液（此时可颠倒离心管用手指轻弹管壁，目的是让Chelex-小颗粒粘到小胶带上）。注：加提取液时一定要先把液体用移液枪吸打，目的让Chelex-小颗粒在水中均匀分散。
水浴处理将步骤3中加有提取液的离心管放到水浴锅内进行56℃水浴10min；然后取出震荡离心（也可不用震荡离心，直接将取出后的离心管上下颠倒，并用手指轻弹管壁）；之后，将离心管再次放入到56℃水浴锅内水浴10min。
两次水浴完成后，将离心管在振荡器上轻轻震荡，然后在离心机内离心。离心完成后，就可以直接吸取上清液进行PCR扩增基因片段了（一般25μL的反应管，加2μL的上清DNA提取液即可满足PCR扩增）。注：切记用于PCR吸取时不要吸取到底部的Chelex-小颗粒；根据小编的经验，水浴时也可以直接一次性水浴15min然后取出震荡离心用于后续扩增。
PCR的反应体系和反应参数，大家可以结合自己实验室和自己的情况或参考他人文献来具体安排，这里小编就不再详述。
接下来小编为大家展示我通过这种方法对ITS和COⅠ基因的扩增情况（测序峰图可显示序列扩增的好坏），小编采用这种提取方法还扩增了其它种类的基因，扩增效果均非常满意。
ITS测序峰图质量如下图：
图片来源于本文COⅠ基因测序峰图质量如下图：
图片来源于本文大家可以看到，这种方法获得的菌的DNA在扩增测序后峰图质量也是相当的好，您可以和采用试剂盒提取的结果进行对比。
总之在我看来，这种方法可以对几乎所有能够培养的真菌（如丝核菌，炭疽菌，青霉菌等）和不能培养的真菌（如霜霉菌，锈菌，白粉菌等）进行DNA的快速提取，来满足我们的实验需求。
如果有大量的样本需要做，又想在很短的时间内对这些样本进行鉴定，那么这种方法是切实可行的。
